Кольцевая реакция с молоком на бруцеллез инструкция

Бруцеллез – хронически протекающая болезнь животных и человека, вызываемая бактериями, объединёнными под общим названием Brucella. По классификации (2015 г.) Объединенного Комитета экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу род Brucеlla состоит из 11 видов, которые подразделяются на ряд биоваров: Brucella melitensis (мальтийская), Brucella abortus (Brucella bovis, бычья), Brucella suis (свиная) и Brucella canis (собачья).

Бруцеллез различных видов встречается на всех континентах, включая и Антарктиду. К бруцеллезу восприимчивы 60 видов позвоночных животных, 30 видов кровососущих клещей, двух блох, двух видов комаров, а также домовые мухи, рептилии, амфибии, дельфины, киты, каланы и рыбы.

В период с 2008 года по первое полугодие 2020 года в России зарегистрировано 4854 неблагополучных пунктов с заболеванием КРС, в которых выявлено 115 980 голов больных животных и 527 неблагополучных пунктов по бруцеллезу мелко­го рогатого скота (МРС), в которых зарегистрировано 19 866 больных овец и коз.

Важным звеном в ликвидации бруцеллеза животных является своевременная диагностика. Диагноз бруцеллез устанавливают на основании результатов бактериологического, серологического, молекулярно-генетического и аллергического исследований с учетом эпизоотических данных, а также клинических и патологоанатомических признаков болезни.

Наиболее информативный метод прижизненной диагностики бруцеллеза является серологический метод, основанный на иммунологических реакциях, в основе которых лежат специфические взаимосвязи между антителом и антигеном.

Через неделю после развития заболевания в крови появляются иммуноглобулины класса М (IgM), концентрация которых достигает максимального значения в течение первых нескольких недель, а затем постепенно снижается (острая фаза заболевания), и на 2-3 неделе образуются сывороточные IgG и немногим позже – IgA. Для хронического бруцеллеза характерно отсутствие специфического IgM, в крови возможно циркуляция IgA и IgG или одного из них.

В настоящее время в РФ применяются 14 диагностических (серологических) тестов на бруцеллез (РА, РСК, РНГА, РИД с О-ПС антигеном, РБП, КР с молоком, ИФА и др.). Часто практические специалисты задают вопросы, почему такое количество серологических реакций и нельзя ли меньшим количеством реакций получить максимальный достоверный результат?

В связи с тем, что бруцеллез протекает своеобразно почти у каждого в отдельности взятого животного, в зависимости от возраста, пола, беременности, физиологического состояния, вирулентности возбудителя и др., то в одном и том же неблагополучном стаде при возникновении инфекции наблюдаются индивидуумы, резко отличающие по времени и напряжению продукции антител. Поэтому показания одной и той же реакции выраженно колеблются в зависимости от давности течения болезни и степени ее патологического проявления. Так, недавно инфицированные животные реагируют в РА в большем проценте, чем длительно болеющие. Истощенные животные могут не реагировать, либо реагировать очень слабо по всем реакциям.

Поэтому считается общепризнанным, что при постановке двух, трех, четырех и более серологических реакций выявляется больных животных больше, чем при одной какой-либо реакции.

Однако, ориентировочный (требующий подтверждения) диагноз на бруцеллез у животных можно установить с помощью простых серологических тестов: роз бенгал пробы (РБП) и кольцевой реакции (КР) с молоком, не требующих лабораторных условий, выполняемых непосредственно на фермах.

Роз бегал проба (РБП)

По сравнению с другими методами серологической диагностики бруцеллеза РБП обладает следующими преимуществами: высокой чувствительностью, способностью в короткие сроки после заражения выявлять специфические бруцеллезные антитела (широкий набор классов и подклассов IgM, IgG, IgA) и благодаря кислой реакции антигена ингибировать проявления неспецифических антител, а также стабильностью показаний, технической простотой постановки, требующей небольшой затраты труда и времени, четкостью и быстротой получаемых результатов.

Метод:

Сущность метода заключается в выявлении специфических антител в сыворотке крови животных, основанном на способности антител сыворотки агглютинировать бруцеллезный антиген, результатом чего является формирование выраженной агглютинации окрашенных бруцелл антигена в виде крупных или мелких хлопьев розового цвета.

РБП применяют как экспресс-метод диагностики бруцеллеза у не иммунизированного противобруцеллезными вакцинами крупного рогатого скота, яков, буйволов, зебу, коз, овец, лошадей, верблюдов, северных оленей (маралов), свиней и собак.

Перед постановкой реакции антиген и исследуемые сыворотки выдерживают 30-40 минут при комнатной температуре. Антиген тщательно встряхивают.

Реакцию проводят на чистых эмалированных пластинах или изразцовых плитках с лунками при температуре не ниже 18°С. Исследуемые сыворотки крови в дозе 0,03 мл вносят на дно лунки шприцом – полуавтоматом или микропипеткой. При исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов в каждую лунку рядом с сывороткой при помощи пипетки для антигена или микропипетки вносят 0,03 мл (2 капли) антигена, а при исследовании сывороток крови овец, коз, северных оленей (маралов), свиней, собак — 0,015 мл (1 каплю) антигена. Затем антиген в каждой лунке тщательно смешивают с сывороткой активными движениями ручного смесителя до получения однородной жидкости, распределяя ее при этом по всей поверхности лунки. Пластинку с сыворотками и антигеном покачивают осторожными вращательными движениями или при помощи аппарата, предназначенного для этой цели. Реакцию учитывают невооруженным глазом в течение 4 минут после смешивания сыворотки с антигеном при слегка наклоненном положении пластинки. При положительной реакции в течение 4 минут появляются мелкие или крупные хлопья агглютината розового цвета. Агглютинацию, которая происходит позже 4 минут, не учитывают.

В начале работы ставят контроль антигена с негативной и позитивной бруцеллезной сыворотками в тех дозах, а также антигена на спонтанную агглютинацию (к 0,03 мл физиологического раствора добавляют 0,03 мл антигена).

Результат:

Реакцию считают отрицательной при отсутствии агглютинации (смесь гомогенна равномерно окрашена).

В благополучных по бруцеллезу хозяйствах все сыворотки крови от животных, с которыми получена положительная РБП, в тот же день или на другой день исследуют в РА РСК (РДСК) или РА И РИД.

При получении положительных, отрицательных или сомнительных результатов в РА и РСК (РДСК) или РА и РИД их оценку проводят в соответствии с действующими санитарными и ветеринарными правилами.

Кольцевая реакция (КР) с молоком

Высокую оценку КР с молоком получила как в нашей стране, так и за рубежом. Все исследователи отмечают выраженную чувствительность, доступность и быстроту метода. С помощью этой реакции обследуют молочные фермы не менее 3-4 раз в год и рыночное молоко, при этом пробы молока отбирают прямо от коров при доении из бидонов любого объема.

Метод:

Сущность реакции состоит в выявлении антигеном специфических антител в молоке больных бруцеллезом или иммунизированных агглютиногенными противобруцеллезными вакцинами коров. Положительная реакция проявляется в образовании синего кольца в верхнем слое сливок.

Комитет экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу (шестой доклад, 1986) считает, что в молоке, как и в сыворотке крови крупного рогатого скота, присутствуют в различных сочетаниях изотипы IgG_1,
IgG₂ и IgA. Причем IgA, являющийся секреторным иммуноглобулином, в молоке находится в значительном большем количестве, чем в сыворотке крови и, следовательно, играет главную роль в кольцевой реакции.

Методика постановки КР с молоком достаточна проста. В пробирки (лучше Флоринского) вносят 2 см³ молока пипеткой или дозатором. Антиген вносят по 0,1 см³
в каждую пробирку с пробой молока. При исследовании каждой партии молока ставят контрольные пробы:

— молоко от здоровой коровы (буйволицы);

— смесь молока здоровой коровы (буйволицы) с бруцеллезной сывороткой (0,1 см³ сыворотки на см³ молока).

После внесения антигена пробирки встряхивают и выдерживают на водяной бане при температуре 37-38°С в течение 1 часа или в термостате в течение 2 часов.

Результат:

Результаты реакции учитывают визуально через 30-40 минут после извлечения штативов из водяной бани (термостата) и оценивают в крестах по следующей схеме:

— (+++) три креста — четко выраженное синее кольцо в верхней части столбика молока в слое сливок, остальная часть молока остается белой;

— (++) два креста — четко выраженное синее кольцо в верхней части столбика молока в слое сливок, остальная часть молока имеет синеватый цвет;

— (+) один крест — синее кольцо в слое сливок выражено слабо и весь столбик молока имеет синий цвет;

— (-) минус — столбик молока остается равномерно окрашенным в первоначальный синий цвет, который был получен сразу после смешивания с антигеном, а слой сливок белого или слегка желтоватого цвета.

Все пробы молока с оценкой в (+++) три креста и (++) два креста считают положительными, (+) один крест — сомнительным.

При получении отрицательных результатов КР по всему стаду его считают благополучным по бруцеллезу.

Сыворотку крови животных стада, в котором выявлены особи, сомнительно или положительно реагирующие в КР с молоком, исследуют на бруцеллез в РБП или в РА и РСК (РДСК), или в РА и РИД, или в РНГА, или в ИФА. При этом проводят клинический осмотр животных и исключают их заболевание маститами.

При получении положительных результатов исследуемых сывороток крови на бруцеллез с животными стада поступают в соответствии с действующими санитарными и ветеринарными правилами.

Заключение

Таким образом две серологические реакции: роз бенгал проба (РБП) и кольцевая реакция (КР) с молоком являются прижизненными предварительными экспресс — диагностическими тестами бруцеллеза животных в благополучных стадах. Эти серологические реакции просты в использовании и выполняются в полевых условиях.

Тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в роз бенгал пробе (РБП) и кольцевой реакции (КР) с молоком выпускаются ФКП «Щелковский биокомбинат» и качество их соответствуют всем международным требованиям.

Николай Иванович Зенов, д.в.н., советник директора по производству ФКП «Щелковский биокомбинат»,

Марина Сергеевна Чумакова, ветеринарный врач, специалист по продвижению биопрепаратов ФКП «Щелковский биокомбинат»

Применяется КР с
целью проверки благополучия стад на
бруцеллез крупного рогатого скота и
для проверки молока при продаже его на
рынках.

Компонентами
реакции являются:

— исследуемое
молоко;

—
антиген цветной бруцеллезный для
кольцевой реакции с молоком, который
представляет собой стандартизованную
взвесь убитых бруцелл, окрашенных
гематоксилином в синий цвет;

— сыворотка
позитивная бруцеллезная.

В
агглютинационные пробирки берут по два
мл молока и добавляют по 0,1 мл антигена,
затем пробирки тщательно встряхивают
для перемешивания молока с антигеном.

При
каждой постановке реакции одновременно
с испытуемыми пробами молока ставят
контроли: с молоком от заведомо здоровой
коровы; со смесью молока здоровой коровы
и позитивной бруцеллезной сыворотки
(0,05 мл сыворотки на 1 мл молока). Штативы
с испытуемыми и контрольными пробами
молока помещают в водяную баню или
термостат при 37-38°С на 1 час. Если в молоке
имеются бруцеллезные антитела, то они
образуют с антигеном комплекс, который
адсорбируется на капельках жира и при
отстаивании всплывают вверх, образуя
синее кольцо (остальная часть молока
остается белой) – реакция положительная.

При
отрицательной реакции столбик молока
остается равномерно окрашенным в
первоначальный синий цвет, который был
получен сразу после добавления к нему
антигена, а слой сливок – белого или
слегка желтоватого цвета.

Рис. 67. Капельная
реакция агглютинации на предметном
стекле: а –
положительная; б
– отрицательная

При
получении положительного или сомнительного
результата КР от всех животных берут
кровь для исследования на бруцеллез в
РБП или РА и РСК (РДСК), проводят
эпизоотологическое обследование
хозяйства, клинический осмотр и
исследование животных на заболевание
маститами.

К а п
е л ь н ы й м е т о д РА применяют в основном
для идентификации культур бактерий, а
также для установления их принадлежности
к определенным серогруппам и серовариантам.
Так поступают при диагностике
колибактериоза и сальмонеллезов. Техника
постановки РА сводится к следующему.
На предметное стекло наносят каплю
сыворотки и каплю физиологического
раствора (контроль). Петлю с бактериальной
культурой увлажняют в капле сыворотки,
затем культуру тщательно растирают
рядом с каплей, смешивают с сывороткой
и энергично 6-10 раз покачивают стекло
круговыми движениями. Агглютинация
наступает сразу или не позднее 1-2 мин.
Реакцию агглютинации учитывают при
хорошем освещении. Пользование лупой
облегчает учет реакции.

Агглютинация
проявляется в виде склеивания бактериальной
массы и полного или частичного просветления
жидкости.

При
отрицательной реакции культура после
тщательного смешивания с каплей сыворотки
образует гомогенную взвесь (рис. 67).
То
же самое должно быть при проведении
контроля (антиген + физиологический
раствор).

Р о з-б е н г а л п
р о б а (РБП)

Пластинчатую
реакцию агглютинации с бруцеллезным
роз-бенгал антигеном применяют для
исследования сывороток крови при
диагностике бруцеллеза у многих видов
животных.

Компонентами РБП
являются:

— испытуемые
сыворотки крови;

—
бруцеллезный антиген для РБП, изготовляемый
на биопредприятиях, представляет собой
стандартизированную суспензию в буферном
растворе инактивированных нагреванием
и фенолом бруцелл, окрашенных бенгальским
розовым в розовый цвет;

— позитивная
бруцеллезная и негативная сыворотки;

— 0,5%-ный
карболизированный физиологический
раствор.

Реакцию
проводят на чистых сухих эмалированных
пластинках с лунками при температуре
18-30°С.

Исследуемые
сыворотки крови в дозе 0,03 мл вносят на
дно лунки. При исследовании сывороток
крупного рогатого скота, лошадей,
верблюдов, свиней в каждую лунку рядом
с сывороткой вносят 0,03 мл антигена, а
при исследовании сывороток других
животных – 0,015 мл, тщательно смешивают
покачиванием и легким вращением в
течение 4 мин. Одновременно проводят
контроли антигена с позитивной и
негативной сыворотками, с физраствором.

Реакцию
считают положительной при выраженной
агглютинации окрашенных бруцелл в виде
мелких или крупных хлопьев розового
цвета, выделяющихся на белом фоне лунки.
Реакцию считают отрицательной при
отсутствии агглютинации (смесь гомогенна,
равномерно окрашена).

Р е а к ц и я г е м
а г г л ю т и н а ц и и (РГА)

Эта
реакция не относится к реакциям
иммунитета, так как является результатом
действия естественных гемагглютининов
некоторых бактерий и вирусов на
эритроциты, что влечет за собой их
агглютинацию.

Реакцию ставят на
плексигласовых панелях с лунками.

Исследуемый
материал разводят физраствором и к этим
разведениям добавляют равный объем
1-2%-ной взвеси эритроцитов, после чего
панели с реакцией помещают в термостат
на 30 мин или оставляют при комнатной
температуре на 1 ч.

Учет
реакции производят по характеру осадка.
При положительной реакции осадок из
склеившихся эритроцитов имеет форму
раскрытого «зонтика» с изрезанными
краями, а при отрицательной — компактный
диск в виде «кнопки» с ровными краями.

Реакция
гемагглютинации позволяет только
выявить гемагглю-тинирующую способность
бактерий и вирусов.

Для
идентификации этих микроорганизмов в
дальнейшем используют реакцию торможения
гемагглютинации.

Р е а к ц и я т о р
м о ж е н и я г е м а г г л ю т и н а ц и и
(РТГА)

РТГА
– иммунная реакция, в которой специфические
антитела, взаимодействуя с антигеном,
лишают его способности агглютинировать
эритроциты.

Реакция
проводится в два этапа. На первом этапе
разводят специфическую сыворотку от
1:10 до 1:1280, К каждому разведению сыворотки
добавляют равный объем жидкости,
содержащий антиген в четырехкратном
титре, который определен в РГА. Если
титр антигена равен 1:640, агглютинируют
эритроциты, делают разведение в 4 раза
концентрированнее – 1:160.

После
инкубирования при 37°С в течение 30 мин
на втором этапе к этой смеси добавляют
равный объем 1-2%-ной взвеси эритроцитов.
Если сыворотки и антигена взято по 0,25
мл, то эритроцитов добавляют 0,5 мл.

Контролем
является проба, где сыворотка заменена
физраствором. Реакция читается после
выдерживания в течение 30 мин в термостате
или 45 мин при комнатной температуре.

При
положительной РТГА образуется плотный
осадок эритроцитов (задержка реакции)
на дне пробирки, имеющих вид «пуговки»
диска.

При отрицательной
РТГА отмечается выраженная гемагглютинация
в виде «зонтика».

Реакция
используется для идентификации и
типизации выделенного антигена,
титрования вируссодержащих жидкостей
и материалов и серологическом диагностики
вирусных инфекций.

Р е а к ц и я н е п
р я м о й (п а с с и в н о й) г е м а г г л ю
т и н а ц и и (Р Н Г А)

Сущность
этой реакции заключается в том, что на
поверхность эритроцитов адсорбируют
или антиген, или антитела (иммуноглобулины),
которые приобретают способность
агглютинироваться в присутствии
специфических антител или антигена.

Главными
достоинствами РНГА – высокая
чувствительность и специфичность,
техническая простота, стабильность
используемых компонентов.

РНГА применяют
при диагностике инфекционных болезней:

1) для
обнаружения в титрования антител в
исследуемой сыворотке крови с помощью
известного эритроцитарного антигенного
диагностикума;

2) для
идентификации неизвестного антигена
с помощью известного иммуноглобулинного
эритроцитарного диагностикума.

Учет РНГА проводится
так же, как и при постановке РГА.

Задания для
самостоятельной работы

1.
Провести постановку и учет результатов
реакции агглютинации капельным методом
с неизвестным антигеном с использованием
набора агглютинирующих сальмонеллезных
сывороток.

2.
Провести постановку реакции агглютинации
классическим (пробирочным методом) на
бруцеллез с сыворотками крови крупного
рогатого скота (учет результатов провести
на следующем занятии).

3.
Ознакомиться с результатами кольцевой
реакции с молоком на бруцеллез, с реакцией
гемагглютинации с Роз-бенгаловой пробой
на бруцеллез.

Вопросы для
самоподготовки и контроля знаний

1.
Как называются компоненты в реакции
агглютинации?

1. Антитела.

2. Антиген.

3. Осадок, продукт
соединения антигена с антителом.

А. Агглютинат.

Б. Агглютиноген.

В. Агглютинины.

2.
Для постановки реакции агглютинации
необходимо приготовить исходное
разведение исследуемой сыворотки 1:25.
Какой из приведенных вариантов
удовлетворяет это условие?

А. 0,3 мл сыворотки
+ 4,7 мл физраствора.

Б. 0,2 мл сыворотки
+ 4,8 мл физраствора.

В.
0,1 мл сыворотки + 4,9 мл физраствора.

3.
При чтении реакции агглютинации в одной
из пробирок установлены следующие
признаки – жидкость мутная (непрозрачная),
на дне небольшой осадок. Дать оценку
реакции агглютинации на плюсовой
системе.

А. ++++

Б. +++

В. ++

Г. +

Д. –

4.
При чтении реакции агглютинации на
бруцеллез с сывороткой крупного рогатого
скота получены результаты:

1:50 +++, 1:100 +++, 1:200 ++,
1:400 ++. Дайте оценку реакции.

А. Отрицательная.

Б.
Сомнительная.

В. Положительная.

5.
В
лабораторию присланы пробы сыворотки
крови крупного рогатого скота. Какие
разведения сыворотки нужно приготовить
для постановки реакции агглютинации
на бруцеллез?

А. 1:50,1:100, 1:200,
1:400.

Б. 1:25, 1:50, 1:100,
1:200.

6.
Какие изменения претерпевает антиген
под действием специфических антител в
реакции агглютинации?

А. Выпадает осадок
на границе обеих жидкостей.

Б. Склеивается.

В.
Растворяется.

7.
При положительной реакции агглютинации
в пробирке наблюдается осадок в виде
«зонтика», при встряхивании которого
образуются крупные хлопья. К какому
виду агглютинации относится данная
реакция?

А. Н-агглютинация.

Б. О-агглютинация.

8.
Проведена реакция агглютинации методом
кольцевой пробы с молоком на бруцеллез,
в результате чего проба молока стала
белой и на его поверхности образовалось
синее кольцо. Дайте оценку реакции.

А. Положительная.

Б. Отрицательная.

Соседние файлы в предмете Микробиология

• #
• #

Диагностическое значение кольцевой реакции с молоком и сыворотки крови при бруцеллезе крупного рогатого скота

• Авторы
• Руководители
• Файлы работы
• Наградные документы

Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке «Файлы работы» в формате PDF

Введение

Выбор темы неслучаен. Я живу в сельской местности и, зная о пользе молока, наша семья старается брать молоко у частников. Но недавно я прочитал информацию о серьезных заболеваниях, передающихся через молоко и мясо. У знаменитой актрисы, сыгравшей роль Фроси Бурлаковой, Савинова Е.Ф., стали проявляться симптомы непонятного заболевания, которое врачи долгое время не могли диагностировать. Физическое недомогание сопровождалось приступами психического расстройства. Как оказалось, причиной был бруцеллез – зооинфекция, передающаяся человеку от животных, в основном коров, и поражающая весь организм. Савинову погубило ее пристрастие к парному коровьему молоку. Инфекция поразила мозг и центральную нервную систему, результатом чего стала вялотекущая шизофрения. Ей было всего 43 года. (5)

Цель моей работы: доказать, что диагностическое значение кольцевой реакции с молоком и сыворотки крови при бруцеллезе крупного рогатого скота является основным серологическим методом для определения заболеваемости.

Задачи: Изучить материалы о заболеваемости бруцеллезом крупного рогатого скота в Башкортостане и Кушнаренковском районе за период 2020-2022 год; сделать анализы кольцевой реакции с пробами молока и сыворотки крови 50 лактирующих коров стационарно благополучных по бруцеллезу 5 хозяйств Кушнаренковского района никогда не подвергавшихся иммунизации противобруцеллезными вакцинами на базе ГБУ Башкирская НПВЛ отдела серологии и патоморфологии; сделать анализ молока коровы, чьё молоко наша семья употребляет в пищу; на основе собранной информации сформулировать выводы о заболеваемости бруцеллезом в Башкортостане и Кушнаренковском районе; провести информационную работу среди сверстников и их родителей о профилактике заболеваемости; осветить изученную тему в средствах массовой информации. (приложение 1,3)

Гипотеза исследования: можно предположить, что не пастеризованное молоко, которое наша семья употребляет в пищу, заражено бруцеллезом.

Объект исследования: молоко и сыворотка крови 50 лактирующих коров стационарно благополучных по бруцеллезу 5 хозяйств Кушнаренковского района и из частного подворья, никогда не подвергавшихся иммунизации противобруцеллезными вакцинами.

Предмет исследования: серологические реакции КР, ИФА по пробам молока коров и по сыворотке крови РСК, РА, РИД О- ПС.

Методы исследования: Диагностические методы исследования сыворотки крови, основанные на специфическом взаимодействии антигенов и антител in vitro. Изучение документов ГБУ Башкирская НПВЛ отдела серологии и патоморфологии; анализ источников информации; обработка полученных результатов.

Практическая значимость данного исследования: профилактика общих заболеваний для человека и животных.

Глава 1. Зооантропонозы.

1.1 Бруцеллез.

Зооантропонозами называют болезни, общие для человека и животных. Известно около таких 100 заболеваний среди них бешенство, сибирская язва, токсоплазмоз и бруцеллез, и другие.

Бруцеллез — зоонозное инфекционно-аллергическое заболевание, характеризующееся множественными механизмами передачи возбудителя, волнообразным рецидивирующим течением инфекционного процесса, склонностью к хронизации, протекающее с преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата, сердечно-сосудистой, нервной и половой систем. Это социально значимое инфекционное заболевание, приносящее значительный экономический ущерб и обусловливающее высокий уровень инвалидизации больных.

Первое описание бруцеллёза было сделано в 1861 году английским военным врачом Ф. Марстоном. В 1887 году британский врач Дэвид Брюс на острове Мальта выделил культуру микроба и назвал его мальтийским микрококком; в честь него позднее возбудитель заболевания получил название Brucella, а вызываемая им болезнь – бруцеллез. Бактерии рода Brucella состоят из 12 самостоятельных видов. Бруцеллы попадают в окружающую среду с молоком, мочой, калом больных животных, загрязняя микробами почву, подстилку, корм, воду, которые, в свою очередь, становятся факторами, обусловливающими заражение человека. (1)

1.2. Способы передачи заболевания.

Человек заражается при контакте с больными животными. Заражение может произойти в результате потребления мяса, других животных продуктов или зараженной воды, а также через переносчиков — многочисленных кровососущих насекомых. Бруцеллы могут проникать в организм человека через различные повреждения и даже неповрежденные кожные покровы. Заражение может произойти при уходе за больными животными, а также через предметы, зараженные их выделениями, поэтому заболевание очень часто носит профессиональный характер (болеют доярки, телятницы, пастухи, работники ветеринарной службы, скотобоен, мясоперерабатывающей промышленности).

Заражение человека также возможно в результате употребления сырого молока от больных животных и приготовленных из него молочных продуктов, недостаточно термически обработанного мяса (национальные особенности приготовления пищи: строганина, шашлык с кровью, сырой фарш и другое). (4)

1.3 Симптомы заболевания и последствия.

Инкубационный период заболевания (время от контакта с больным животным до появления клинических симптомов) составляет 1-2 недели, а иногда — до двух месяцев. Начинается заболевание, как правило, с повышения температуры тела до 39-40°С (характерны подъемы температуры в вечерние и ночные часы) в течение 7-10 дней и более, в отдельных случаях при отсутствии соответствующего лечения температура держится до 2-3-х месяцев. Лихорадка сопровождается ознобом, повышенной потливостью, слабостью, часто увеличиваются печень и селезенка. В последующем развиваются артриты (тазобедренного, крестцово-подвздошного и других крупных суставов), бурситы, спондилиты, невралгии, невриты, реже — менингиты, энцефалиты, у мужчин могут развиваться орхиты, эпидидимиты, у женщин — оофориты, сальпингиты. В тяжелых случаях развивается поражение сердца — эндокардит. При несвоевременной диагностике и поздно начатом лечении заболевание переходит в хроническую форму (до 80% случаев). (4)

1.4. Статистические данные заболеваемости бруцеллёзом по России.

Наибольшая заболеваемость людей бруцеллёзом регистрируется в Северо-Кавказском и Южном федеральных округах (до 70-80 % случаев бруцеллёза у людей). Однако ежегодно бруцеллез у людей регистрируется на территории и других федеральных округов (в 2021 году — в 22 субъектах Российской Федерации). В среднем в Российской Федерации за последние 10 лет ежегодно регистрируется 327 случаев, в 2022 году зарегистрировано 474 случая бруцеллеза. (6) (таблица 1)

Таблица 1

Сведения о заболевании бруцеллезом людей за 2021/2022 гг.

Диагностировать бруцеллез непросто. Важное значение в постановке диагноза имеет эпидемиологический анамнез, а также лабораторное обследование заболевшего.

Глава 2. Диагностическое значение кольцевой реакции с молоком и сыворотки крови при бруцеллезе крупного рогатого скота.

2.1. Диагностикумы при исследовании на бруцеллёз. Серологические реакции.

Серология происходит от латинского слова «serum» т.е. сыворотка, в организме животных находятся антитела, каждые, из которых строго специфичны на определенное заболевание и которые можно определить с помощью специальных диагностикумов. Эти исследования проходят в короткие сроки и обладают большой диагностической достоверностью.

Для массовых профилактических и диагностических прижизненных исследований скота на бруцеллез широко используют РА (реакция агглютинации), РСК (реакция связывания комплемента), КР (кольцевая реакция) с молоком коров.

Серологические реакции протекают в 2 фазы. Обязательное условие — присутствие электролитов.

Фазы серологических реакций. Первая фаза. Специфическая. Происходит взаимодействие АГ-нных детерминантных групп с активными центрами специфических иммуноглобулинов, сформировавшихся под влиянием этого АГ. Последние, образуются в ответ, на поступление в организм этого АГ. Видимых изменений не происходит. Вторая фаза. Неспецифическая. Комплекс АГ+АТ взаимодействует с неспецифическими факторами среды, в которой происходит укрупнение частиц в результате чего реакция становится видимой. Видимые изменения могут быть разными. Задачи серологического метода – это поиск неизвестного АГ по известному АТ и поиск неизвестного АТ по известному АГ. Исследователями доказано, что при заболевании бруцеллезом специфические антитела могут содержаться не только в сыворотке крови животных, но и в молоке (1). Молоко, как наиболее доступный для исследования объект при диагностике бруцеллеза, представляет интерес, потому что в нем циркулируют, специфические антитела, образованные в молочной железе вследствие локального бруцеллезного процесса, которые могут отсутствовать в крови.

Тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в кольцевой реакции (КР) с молоком выпускаются ФКП «Щелковский биокомбинат» и качество их соответствуют всем международным требованиям. Эта реакция официально применяется для исследования коровьего молока на бруцеллез. В основе этого диагностического теста лежит взаимодействие специфических антител с цветным бруцеллезным антигеном, представляющий собой микробную взвесь вакцинного штамма B. abortus 19, окрашенного гематоксилином. Преимущество ее заключается в высокой чувствительности, простоте постановки и быстроте получения результатов исследования. Реакцию ставят в серологических пробирках Флоринского, которые нумеруют в соответствии с описью проб молока. В пробирки вносят по 2 мл молока. После каждой пробы пипетку двукратно промывают теплой водой. Антиген вносят по 0,1 мл в каждую пробирку с пробой молока. После внесения антигена в каждые 10 проб штатив с пробирками энергично встряхивают для равномерного распределения препарата в молоке. При постановки реакции одновременно с испытуемыми пробами молока ставят следующие контроли: молоко от заведомо здоровой коровы, смесь молока здоровой коровы с позитивной бруцеллезной сывороткой. Штативы с испытуемыми и контрольными пробами молока помещают в водяную баню при температуре 37-38⁰С на 1 час и затем выдерживают 30 минут при комнатной температуре. Результаты реакции учитывают визуально и оценивают в крестах (0-3). При положительной реакции четко выраженно синее кольцо в верхней части столбика молока в слое сливок, остальная часть молока остается белой, в случае отрицательной – кольцо жира белое, а столбик молока имеет голубую окраску. (2,3), (приложение 4,5,6,7,8)

2.2 Материалы и методика исследования.

Мы обобщили и проанализировали материалы исследований бруцеллеза животных, проведенных в ветеринарных лабораториях Республики Башкортостан за 2020-2022 гг. Для выяснения возможности выявления бруцеллезных антител исследовали пробы молока от 50 коров хозяйств и коровы частного подворья Кушнаренковского района в кольцевой реакции и ИФА, параллельно в РСК, РА и РИД с О-ПС антигеном и ИФА исследовали сыворотку крови этих животных. РСК, РА, РИД с О-ПС антигеном, ИФА ставили согласно «Наставлению по диагностике бруцеллеза животных», 2003 и ГОСТ 34105-2017 «Лабораторная диагностика бруцеллеза. Серологические методы». (2,3), (приложение 9,10)

Для проведения исследований использовали Тест-системы для диагностики бруцеллеза животных в РА, РСК и КР с молоком (ФКП «Щелковский биокомбинат», Московская область), набор для диагностики бруцеллеза животных в реакции иммунодиффузии (ФКП «Курская биофабрика») Иммуноферментный анализ исследуемых сывороток проводили с применением тест-системы ИФА фирмы «БИОК». (приложение 2)

2.3. Результаты исследования.

В целях своевременного выявления и предотвращения распространения бруцеллеза животных проводятся плановые исследования. Планы составляет Управление ветеринарии Республики Башкортостан, ориентируясь на количество поголовья в районах, кратности исследований, государственное задание.

Крупный рогатый скот, содержащийся в хозяйствах, поставляющее молоко, должны проходить плановые серологические исследования по РА и РСК 2 раза в год. Молоко, полученное от коров, поступающее на продовольственные рынки исследуется на бруцеллез методом кольцевой реакции не реже раза в месяц.

На базе ГБУ Башкирская НПВЛ отдела серологии и патоморфологии мы провели исследования молока от 50 лактирующих коров стационарно благополучных по бруцеллезу 5 хозяйств и коровы личного подворья Кушнаренковского района, никогда не подвергавшихся иммунизации противобруцеллезными вакцинами. Все исследованные пробы молока дали отрицательный результат, также при исследовании сывороток крови от указанных животных в РА, РСК и РИД с О-ПС антигеном были отрицательные результаты. (приложение 3)

2.4. Статистические данные по исследованиям на бруцеллёз по Башкортостану.

Всего за 2022 год на бруцеллез животных проведено 961 854 экспертиз по 1 885 903 исследованиям; в том числе по РА 924 326, что составило 49,0% от исследований, по РСК 951 268 — 50,4 %, по РИД с О-ПС антигеном 6 680 – 0,4 %, по КР — 2 712 — 0,1%, по ИФА – 816 – 0,04%, ПЦР 101 – менее 1%. (таблица 2)

Таблица № 2

Серологическая диагностика бруцеллеза животных

в Республике Башкортостан за 2020-2022 гг.

Уменьшение количества исследований на бруцеллез связано с уменьшением исследований по РБП. До 2017 г. все поголовье лошадей, крупного рогатого и мелкого рогатого скота 100% исследовались по 3 основным реакциям.

Республика Башкортостан была благополучна по бруцеллезу с 2010 года. Проводится иммунизация крупного рогатого скота противобруцеллезной сухой живой вакциной из штамма 82 в Мелеузовском районе СПК «Ашкадан» (исследовано вакцинированных животных – 2 131 голов).

В мае 2022 года при плановых исследованиях в Учалинском отделе диагностике, были выявлены положительные пробы среди мелкого рогатого скота личного подсобного хозяйства д. Кунакбаево. В 2022 г. на хозяйства Учалинского района был наложен карантин по бруцеллезу. В 2022 г с Учалинского района в ГБУ Башкирская НПВЛ поступило 253 экспертизы от мелкого рогатого скота по 759 исследованиям и получено 58 положительных результата. В Учалинском отделе диагностики выявлено 9 положительных проб от мелкого рогатого скота. В августе 2022 года карантин по бруцеллезу с района снят. Хозяйство района было оздоровлено.

В 2022 году были исследованы на бруцеллез животных: 7 оленей, 96 маралов (из хозяйства Белорецкого района), 2 яка, 5 ланей, 17 пони, 2 осла (из контактных зоопарков) результаты исследований отрицательные.

За 2022 год в лаборатории были доставлены для исследования сыворотка крови от абортировавших животных: от крупного рогатого скота – первично 72 пробы, повторно – 45 проб; от лошади – первично 4 пробы, повторно – нет. Все пробы исследованы на бруцеллез, лептоспироз, на хламидийные инфекции и листериоз.

Исследование на бруцеллёз молока по кольцевой реакции в количестве 2712 проб, дали отрицательные результаты.

Глава 3. Профилактика заболеваемости.

Доказано, что в сыром молоке, хранящемся в холодильнике, возбудитель бруцеллеза сохраняется до 10 календарных дней, в сливочном масле — более 4 недель, в домашнем сыре — до 3 недель, брынзе — до 45 дней, в простокваше, сметане — до 15 календарных дней, в кумысе — до 3 календарных дней, в мясе — до 12 календарных дней, во внутренних органах, костях, мышцах и лимфатических узлах инфицированных туш — более 1 месяца, в овечьей шерсти, смушках — до 4 месяцев. В замороженных инфицированных мясных и молочных продуктах бруцеллы остаются жизнеспособными в течение всего срока хранения. В почве сохраняют жизнеспособность до 100 календарных дней, в воде — до 114 календарных дней. Таким образом, пищевой путь может привести к заражению людей не только в очагах бруцеллеза, но и далеко за их пределами. Важно знать, что инфекция не передается от человека к человеку.

Для лечения бруцеллеза используются антибиотики. При своевременной диагностике и назначенном лечении от бруцеллеза можно излечиться.

В целях профилактики бруцеллеза важно выполнять следующие требования: вакцинировать домашних животных; не допускать покупку, продажу, сдачу на убой животных и реализацию животноводческой продукции без уведомления ветеринарной службы; не приобретать мясо и мясные продукты (фарш, колбаса, полуфабрикаты), молоко и молочные продукты не заводского производства, на стихийных несанкционированных рынках; молоко, молочные продукты и продукты животного происхождения, приобретенные у частного производителя, употребляйте только после тщательной термической обработки; отказаться от не пастеризованных молочных продуктов.

А если человек работает в животноводческой промышленности, то обязательно пользоваться резиновыми перчатками; для профилактики профессионального заражения при уходе за больными животными использовать средства индивидуальной защиты (халат, резиновые перчатки, нарукавники, клеенчатые фартуки, резиновые сапоги, средство индивидуальной защиты органов дыхания, очки). (4)

Необходимо помнить, что любое заболевание легче предупредить, чем лечить!

Выводы.

Бруцеллез – хроническая инфекционная болезнь общая для животных и человека, особо опасная и социально значимая инфекция, приносящий значительный экономический ущерб и обусловливающий высокий уровень осложнения заболеваний, приводящей к инвалидности людей.

Это заболевание представляет мировую проблему для медицинского и ветеринарного здравоохранения.

Кольцевая реакция с молоком – простой в осуществлении экспресс-метод диагностики бруцеллеза лактирующих коров. КР можно эффективно использовать в качестве средства контроля благополучия того или иного дойного стада по указанной инфекции. Исследование молока коров на бруцеллез в кольцевой реакции особо важное значение имеет для крестьянско-фермерских и личных подсобных хозяйств. С помощью этой реакции можно очень быстро оценить эпизоотическое состояние по данному заболеванию, а в случаях выявления положительных реакций благодаря оперативно принятым мерам ветеринарных специалистов предотвратить заражение бруцеллезом людей и распространение его среди животных.

Заключение.

Целью своей работы я должен был доказать, что диагностическое значение кольцевой реакции с молоком и сыворотки крови при бруцеллезе крупного рогатого скота является основным серологическим методом для определения заболеваемости. Изучил материалы о заболеваемости бруцеллезом крупного рогатого скота в Башкортостане и Кушнаренковском районе за период 2020-2022 год; на базе ГБУ Башкирская НПВЛ отдела серологии и патоморфологии. Были проведены исследования молока от 50 лактирующих коров стационарно благополучных по бруцеллезу 5 хозяйств Кушнаренковского района, никогда не подвергавшихся иммунизации противобруцеллезными вакцинами. А также исследования молока, которая наша семья употребляет в пищу. Все исследованные пробы дали отрицательный результат, также при исследовании сывороток крови от указанных животных в РА, РСК и РИД с О-ПС антигеном. Выступил перед сверстниками и их родителями с докладом об опасности употребления не пастеризованного молока. Моя гипотеза о том, что не пастеризованное молоко, которое наша семья употребляет в пищу, заражено бруцеллезом, не подтвердилась. Работа цели достигла.

Список источников и литературы:

1. Инфекционные болезни животных / Б. Ф. Бессарабов, А. А. Вашутин, Е. С.Воронин и др.; Под ред. А. А. Сидорчука. – М. : Колос, 2007. – 671 с.

2. Животные. Лабораторная диагностика бруцеллеза. Серологические методы. ГОСТ 34105-2017.- Введ.2018-07-01. – М. Стандартиформ, 2017. – 27 с.

3. Наставление по диагностике бруцеллеза животных. – Москва, 2004. – 61 с.

4. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных /Сборник санитарных и ветеринарных правил/ Госкомсанэпиднадзор России, Минсельхозпрод России. — М: 1996. — С.20-46.

5. https://kulturologia.ru/blogs/250416/29301/

6. http://76.rospotrebnadzor.ru/directions_of_activi/epid_nadzor/5674/

Приложение 1

Посещение ГБУ Кушнаренковская районная ветеринарной станция РБ

Приложение 2

Диагностические наборы для исследования на бруцеллез животных

Приложение 3

ГБУ Башкирская научно-производственная ветеринарная лаборатория

Отдел приема патологического материала

Приложение 4

Исследование проб молока на бруцеллёз кольцевой реакцией

Приложение 5

Первый этап. Кольцевая реакция (розлив молока)

Приложение 6

Второй этап. Кольцевая реакция (добавление антигена)

Приложение 7

Третий этап (постановка в водяную баню)

Приложение 8

Учет реакции (КР с молоком)

Приложение 9

Объяснение реакции связывания комплемента на бруцеллез

Приложение 10

Исследование молока на бруцеллёз на ИФА анализаторе

Учет реакции на бруцеллёз (РИД О-ПС)

Просмотров работы: 40